La citometría de flujo es un método rápido, sensible y específico que permite cuantificar diversas poblaciones celulares y otras partículas en una muestra, ofreciendo soluciones tanto a laboratorios clínicos y como a los de investigación. Aunque se utiliza principalmente en áreas como hematología especializada, inmunología, patología clínica, oncología médica, también tiene aplicaciones en el campo de los estudios microbiológicos.
Las aplicaciones microbiológicas de la citometría de flujo incluyen una amplia variedad de estudios. Entre ellos se incluyen ensayos del ciclo celular bacteriano, evaluación de la susceptibilidad de bacterias a antimicrobianos en muestras clínicas, y el monitoreo de bacterias y otros microorganismos en diferentes muestras (Steen, 2000).
Una de las aplicaciones microbiológicas de la citometría de flujo es la cuantificación de bacterias vivas, dañadas y muertas en una muestra expuesta a un desinfectante, mediante la tinción de las bacterias con colorantes de ADN. Otros métodos pueden implicar un trabajo manual considerable y requerir de cultivos con resultados observables a las 48 horas de incubación. En su lugar, mediante un ensayo de citometría de flujo se pueden tener resultados en menos de una hora, con la ventaja adicional de que este proceso puede ser automatizado (Alsharif & Mandar, 2001).
En un estudio realizado por BD Biosciences para evaluar la eficacia del desinfectante SPOR-KLENZ™ (Steris Corporation, St. Louis, MO), compuesto por peróxido de hidrógeno y ácido peracético, se probó su acción contra las bacterias Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis y Staphylococcus aureus. Las bacterias fueron expuestas durante 10 minutos a diluciones seriadas del desinfectante en agua destilada, con concentraciones que variaron entre 1:2 y 1:512. Posteriormente, las bacterias tratadas se dividieron en dos grupos para su análisis (Alsharif & Mandar, 2001).
Uno de los grupos se sembró en agar RODAC™ D/E Neutralizing (BD Diagnostic Systems, catálogo No. 221232) para neutralizar el SPOR-KLENZ residual y se verificó el crecimiento después de 48 horas. El otro grupo se preparó para un análisis mediante citometría de flujo de forma que todas las bacterias que contienen ADN se tiñen con el colorante permeante, naranja de tiazol, y fluorescen de amarillo a naranja. Las bacterias con membranas dañadas también se tiñen con el colorante impermeante, yoduro de propidio, y fluorescen de naranja a rojo. Estos análisis se realizaron en tubos TruCOUNT™ (BD Biosciences, catálogo No. 340567) y se utilizó un citómetro BD FACSCalibur™ (Alsharif & Mandar, 2001).
La Figura 1 muestra la variación en la viabilidad de las poblaciones de P. aeruginosa tras 10, 30 y 90 minutos de exposición a SPOR-KLENZ. La Figura 2 compara el efecto de SPOR-KLENZ sobre P. aeruginosa utilizando citometría de flujo y recuento en placa. Aunque se observó una diferencia en la respuesta de viabilidad entre ambos métodos, la máxima eliminación de bacterias se alcanzó con ambos a la misma concentración de desinfectante (Alsharif & Mandar, 2001).
Figura 1. Cambio en las poblaciones, vivas y muertas de P. aeruginosa a los 10, 30 y 90 minutos de exposición a 3.1% de SPOR-KLENZ.
Figura 2. Comparación entre el método de citometría de flujo y recuento en placa en P. aeruginosa.
La citometría de flujo permite evaluar la eficacia de desinfectantes o conservantes en tan solo 30 minutos y permite la cuantificación de células o bacterias vivas y muertas. Los resultados son comparables con los que se obtienen mediante recuentos microbiológicos estándar en placas. Este enfoque podría aplicarse a una variedad de aplicaciones, incluyendo la predicción de la estabilidad y potencia de desinfectantes, y estudios microbiológicos donde se necesita detectar más de 100 organismos por mL, como en la efectividad antimicrobiana, estudios nutricionales y evaluación de productos no estériles (Alsharif & Mandar, 2001).
Referencias Bibliográficas
- Alsharif, R., & Mandar Jon. (2001). Bacterial Disinfectant Efficacy Using Flow Cytometry. www.bdbiosciences.com
- Steen, H. B. (2000). Flow cytometry of bacteria: glimpses from the past with a view to the future. In Journal of Methods Microbiological Journal of Microbiological Methods (Vol. 42). www.elsevier.com/locate/jmicmeth
