Papel de la tipificación de antígenos extendida en la medicina transfusional

En este episodio del podcast Ortho Science Bytes, el especialista en Banco de Sangre, Tony Casina, analiza el papel de la tipificación o fenotipado de antígenos extendidos en la Medicina de Transfusión. Cómo esta práctica juega un papel importante en la transfusión de pacientes con drepanocitosis, talasemia y síndrome mielodisplásico, así como en otros pacientes con transfusión crónica, previniendo el desarrollo de anticuerpos extraños que pueden evitar los desafíos que vienen después con problemas complejos de anticuerpos y trae el beneficio adicional o permitiendo encontrar sangre compatible para pacientes que necesitan una transfusión. A continuación, un resumen con la información más importante.

Fenotipado de antígenos de glóbulos rojos

El fenotipo es la expresión física de una característica definida por genes. El concepto de tipificación de antígeno extendido o fenotipado de antígeno extendido tiene aplicación en una variedad de situaciones y fundamentos. Después de la transfusión, los casos más comunes en los que se utiliza el fenotipado son el embarazo, establecimiento de la relación/paternidad y el estado de la enfermedad. Quienes nos dedicamos a la medicina transfusional, pensamos principalmente en la aplicación en transfusión y embarazo.

Entonces, ¿qué es el fenotipado del antígeno del grupo sanguíneo? La mayoría de los que han trabajado en bancos de sangre han realizado algún tipo de fenotipado. Actualmente, las pruebas para un grupo sanguíneo ABO básico y el tipo Rh (D) son una forma simple pero muy importante de fenotipado.

Evolución del fenotipado de los antígenos de los glóbulos rojos en la historia de la medicina transfusional

Todo comenzó en torno al descubrimiento de nuevos grupos sanguíneos cuando se produjo el desarrollo de anticuerpos en humanos debido a la transfusión o embarazo. Estos anticuerpos se probaron en poblaciones o en estudios familiares para mostrar la frecuencia y prevalencia en conjunto con la herencia genética. Por supuesto, el uso del anticuerpo se convirtió en una forma de encontrar sangre compatible para transfusiones. Finalmente, surgió el concepto de tener una fuente de alta calidad para asegurar que el “reactivo” fuera realmente un reactivo de alta calidad capaz de tipificar antígenos con precisión. Las fuentes comerciales se convirtieron en la norma, con reactivos fabricados a partir de fuentes basadas en humanos, animales y plantas (lectina) y aprobados por agencias reguladoras. Luego, a principios de los 80, con tecnología basada en anticuerpos monoclonales, estuvo disponible una nueva fuente para la producción de reactivos. La mayoría de los primeros reactivos se utilizaron en portaobjetos, pero a medida que estuvieron disponibles las pruebas basadas en tubos, la tipificación de antígenos extendida pasó a métodos basados ​​en tubos. Finalmente, se produjo una transición hacia nuevas tecnologías utilizando microplacas y pruebas basadas en columnas.

Prevalencia de antígenos de grupos sanguíneos

A medida que se descubrieron, y posteriormente se definieron bien, los antígenos de los grupos sanguíneos, se realizaron más estudios de población. Estos estudios se centraron en grupos étnicos y regiones del mundo definidas y demostraron que existen diferencias en la frecuencia de genes específicos y, por lo tanto, en la expresión de antígenos. Hay muchos ejemplos de antígenos de grupos sanguíneos que difieren en la población; por ejemplo, en la población afroamericana, el Fy (a-b-) es muy común pero raro en la población caucásica, los individuos Di (a +) son de mayor prevalencia en América del Sur, América Central y Japón, o el Jk (a-b-) en los polinesios, luego, encontrar un individuo Fy (a-) en la población japonesa se considera raro ya que más del 99% de los japoneses son Fy (a +). Como ejemplo de un antígeno comúnmente testeado, la prevalencia del Jka se distribuye de la siguiente manera: caucásicos 77%, negros 92% y 72% en asiáticos.

Para aquellos que son apasionados por estos datos y polimorfismos, hay dos libros de texto que se recomiendan: uno de Mourant et al., “The Distribution of Human Blood Groups and other Polymorphisms”, e información más reciente que incluye diferencias a nivel molecular entre los antígenos de los grupos sanguíneos se puede encontrar en el “the Blood Group Antigens Facts Book” de Reid, Francis-Lomas y Olsson.

Tipificación de antígenos extendida y cómo se usan en hospitales y centros de donantes

La fenotipicación de glóbulos rojos en pacientes se asocia principalmente con la identificación de anticuerpos. Cuando un paciente desarrolla un anticuerpo dirigido hacia un grupo sanguíneo, la confirmación de la identidad de ese anticuerpo se realiza demostrando que el paciente carece del antígeno y, por lo tanto, es capaz de desarrollar ese anticuerpo. La fenotipificación de un paciente puede desempeñar un papel aún mayor de 2 maneras: primero, cuando un paciente tiene lo que parecen ser múltiples anticuerpos que son difíciles de identificar, determinar el fenotipo del paciente puede ayudar a identificar aún más los posibles anticuerpos que pueden estarse formando por el paciente. Esto luego nos permite seleccionar células de manera apropiada para clasificar los posibles anticuerpos que pueden estar presentes y encontrar que las células con un fenotipo coincidente son compatibles. Por supuesto, si son incompatibles, habrá más procesos en la identificación de esos anticuerpos.

En segundo lugar, el fenotipado se convierte en una herramienta valiosa para ayudar a prevenir el desarrollo de anticuerpos cuando se sabe qué antígeno(s) carecen los glóbulos rojos del paciente. Este enfoque ayuda a identificar qué antígeno(s) evitar transfundir al paciente y es fundamental aplicarlo a aquellos pacientes que reciben transfusiones con frecuencia. Esto juega un papel importante en la transfusión de pacientes con drepanocitosis, talasemia y síndrome mielodisplásico, así como en otros pacientes que reciben transfusiones crónicas. La prevención del desarrollo de anticuerpos evita los desafíos que surgen después con problemas complejos de anticuerpos y ayuda a encontrar sangre compatible para el paciente.

Tipificación de antígenos en donantes de sangre

La búsqueda de donantes de sangre con antígeno negativo puede ser bastante laboriosa. En los hospitales, encontrar unidades de donantes en su banco de sangre requiere fenotipado con el antisuero para encontrar donantes negativos para determinado antígeno para su paciente. Conocer la prevalencia del antígeno permite saber cuántas unidades deben analizarse. Por ejemplo, un paciente con anti-Jka debe recibir una transfusión de 2 unidades. La búsqueda de su inventario de sangre requerirá que se analicen unas 10 unidades de sangre con el reactivo anti-Jka para encontrar las 2 unidades. Eso es porque sabemos que alrededor del 75% de la población es Jk (a+). En los bancos de sangre, se vuelve necesario realizar pruebas a los donantes, en particular a los donantes nuevos que se convierten en donantes regulares, para mantener un suministro de unidades negativas de antígeno listas para los pacientes en los hospitales. Los centros de donantes buscan unidades negativas para múltiples antígenos mediante la realización de pruebas con una variedad de antisueros para estar listos para suministrar a los hospitales. En algunos casos, algunos centros utilizan el genotipado basado en ADN para identificar unidades negativas para múltiples antígenos, seguido de un fenotipado serológico. Una vez que se tipifica el antígeno de un donante basándose en la tipificación de dos donaciones diferentes, ese registro histórico se puede utilizar para etiquetar las unidades en el futuro.

Automatización de la tipificación extendida de antígenos en glóbulos rojos

Como se mencionó anteriormente, la búsqueda de donantes de sangre con antígenos negativos puede ser bastante laboriosa. Esto porque el procedimiento requiere muchos pasos y además, ser muy cuidadoso con cada uno ellos, por ejemplo registrando el número de donantes, etiquetando las pruebas, seleccionando los antisueros correctos, dispensando los antisueros, seleccionando los controles de glóbulos rojos, preparando suspensiones de glóbulos rojos, dispensando las suspensiones de glóbulos rojos, incubando (si es necesario), procesando la prueba (centrifugación, lavado, etc.) y finalmente leer y registrar los resultados. Es el mismo concepto para fenotipar a un paciente para múltiples antígenos, ya que se debe aplicar todos los pasos que se acaban de mencionar.

La principal limitante es que siempre que las pruebas se realizan manualmente, hay muchas oportunidades de error. Se requiere mucho orden en el mantenimiento de registros para la tipificación de antígenos extendida. Actualmente, mediante la automatización de las pruebas, se pueden eliminar muchos pasos manuales que son propensos a error y, al mismo tiempo, automatizar las actividades de mantenimiento de registros que se llevan a cabo. Por lo tanto, con la trazabilidad total de los pasos del proceso proporcionada por la automatización junto con la clasificación de reacción, la interpretación y la captura de imágenes, se logra un control total del proceso. Los analizadores automatizados capturan todos los datos y los transfieren mediante la interfaz al sistema de información del laboratorio. La conclusión aquí es que los beneficios que ofrece la automatización en las pruebas del banco de sangre ayudan a extender la tipificación de antígenos, mejorar los resultados y brindar confianza a la transfusión para ese paciente.

Referencias bibliográficas
  1. Casina, T. S. (2020, diciembre 17). The importance of extended antigen typing in Transfusion Medicine. Ortho Clinical Diagnostics. Recuperado el 06 de mayo de 2021, de https://www.orthoclinicaldiagnostics.com/

Acerca de Tony S. Casina – Especialista en Banco de Sangre, SBB(ASCP)

Experto en medicina transfusional como banquero de sangre e inmunohematólogo por más de 40 años. Ha trabajado gran parte de este tiempo en el sector de fabricantes de reactivos de bancos de sangre comerciales con experiencia hospitalaria como tecnólogo médico y director de bancos de sangre. Tony ha brindado asistencia técnica a laboratorios de todo el mundo utilizando los reactivos y analizadores de inmunohematología de Ortho. Ha probado algunos de los problemas de anticuerpos más desafiantes como parte de su experiencia de laboratorio de referencia. Tony ha sido un participante activo en la AABB sirviendo en los comités y actualmente en la Junta Directiva de la AABB. Ha contribuido como presentador a los programas educativos de la AABB y las reuniones regionales de bancos de sangre. Estuvo muy involucrado en el desarrollo del analizador ORTHO VISION®.

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